Adaptado y recopilado por Dr. Carlos Jaramillo ND
Uno de los principales mecanismos que utilizan las células cancerígenas para extenderse y metastizar el cuerpo humano consiste en la destrucción enzimática del tejido conjuntivo adyacente. Los enfoques terapéuticos para controlar este proceso por medio de medicamentos concretos no han tenido éxito y, actualmente, no existen medios disponibles para controlar la metástasis del cáncer. El protocolo de los tratamientos actuales con quimioterapia y radioterapia se centra en la destrucción de las células cancerígenas del cuerpo humano, sin actuar directamente sobre la metástasis. Además, estos tratamientos son tóxicos, no selectivos y están asociados a graves efectos secundarios. La quimioterapia y la radioterapia conllevan el riesgo de desarrollar nuevos focos de cáncer y a través de la destrucción del tejido conjuntivo del cuerpo humano se facilita la extensión del cáncer. Por consiguiente, existe la necesidad de buscar enfoques naturales eficaces y seguros que puedan utilizarse para controlar el proceso de extensión del cáncer en el cuerpo humano.
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Para crecer y extenderse a otras partes del cuerpo, las células cancerígenas degradan la matriz extracelular (ECM) por medio de las metaloproteinasas de la matriz (MMPs) y la plasmina, lo que se traduce siempre en una mayor agresividad del tumor. Rath y Pauling (1992) postularon que los nutrientes tales como los aminoácidos, la lisina (aminoácido) y el ácido ascórbico (Vitamina C) pueden actuar como inhibidores naturales de la matriz extracelular (ECM) a través de las metaloproteinasas de la matriz (MMPs) y plasmina, evitando una mayor agresividad del tumor. Rath y Pauling (1992) postularon que nutrientes tales como los aminoácidos, la lisina y el ácido ascórbico podían actuar como inhibidores naturales de la proteólisis de la matriz extracelular y como tales tenían el potencial para controlar el crecimiento y la extensión del tumor. Estos nutrientes pueden ejercer su capacidad antitumoral por medio de una serie de mecanismos, entre los que se encuentra la inhibición de la MMPs y el fortalecimiento del tejido
conjuntivo adyacente a las células cancerígenas (efecto de “encapsulamiento” del tumor).
Además, también hemos estudiado el efecto del galato de epigalocatequina (EGCG), que es un polifenol derivado del té verde (Camelia Sinenesis). El EGCG es conocido por sus propiedades anticancerígenas tal y como se ha demostrado en distintos estudios experimentales y humanos (Mukhtar y Ahmed, 2000, Valvi, Timmerman et al., 1996).
Materiales y Métodos
Las células del cáncer de mama MDA-MB-231, las células del cáncer de colon HCT 116 y la línea de células del melanoma A2058 se obtuvieron del ATCC. Los fibroblastos dérmicos humanos normales se obtuvieron del Gibeo. En los supuestos que no se indican, se emplearon los cultivos
obtenidos del ATCC.
En los estudios de proliferación de las células cancerígenas, cada tratamiento se repitió ocho veces. En los ensayos de invasión, cada tratamiento se llevó a cabo tres o incluso cuatro veces.
Estudios de proliferación de células
En estos estudios 5X10 células de cáncer de pecho se desarrollaron en el medio de Liebovitz con un 10% de suero bovino fetal (FBS) en 24 placas de cultivo. El medio se utilizó como tal (basal) o con complementos designados. Las placas se incubaron en una incubadora con circulación de aire (sin CO2 complementario) durante cuatro días.
Las células del cáncer de colon HCT116 crecieron en un medio McCoy 5A y se mantuvieron en una incubadora con circulación de aire con un 5% de CO2. Al final del período de incubación, se retiraron los medios y las células se lavaron en los pocillos con PBS, tras lo cual se incubaron durante un período de 3 horas con tinte MTT. A cada pocillo se le añadió dimetilsulfóxido (DMSO, 1ml). Las placas con DMSO se mantuvieron a temperatura ambiente durante 15 minutos con una ligera agitación y, a continuación, el OD de la solución de cada pocillo se midió a 550nm. El OD550 de la solución DMSO del pocillo se consideró directamente proporcional al número de células. El OD550 del tratamiento que no retiraron los medios de los pocillos. Las células de la superficie superior de los separadores se retiraron con cuidado con ayuda de un hisopo de
algodón. Las células que habían penetrado en la membrana Matrigel y se habían trasladado a la superficie inferior del Matrigel se tiñeron con hemacolor (EM Sciences) y se pudieron contar visualmente con el microscopio. Los resultados estaban sujetos al ANOVA y todos los posibles pares se probaron para comprobar su relevancia a p<0,05.
Los medios en distintos estudios se complementaron con ácido ascórbico, prolina, lisina y EGCG en las concentraciones, tal y como se indica en el epígrafe Resultados y Debate.
Zimografía de gelatinasa
La zimografía de gelatinasa se llevó a cabo en gel de poliacrilamida Novex pre-cast del 10% (Invitrogen) con presencia del 0,1% de gelatina. Se cargó el cultivo (20µl) y se llevó a cabo el SDS-PAGE con sistema triglicina-SDS. Después de la electrofóresis, se lavaron los geles con Triton X-100 de 5% durante 30 minutos y se tiñeron. Simultáneamente se desarrollaron los estándares proteínicos y se determinaron los pesos moleculares aproximados.
Resultados y Debate
- Estudio de proliferación de las células cancerígenas
Células del melanoma A2058
La Imagen I muestra el efecto de 10, 20 y 50 µg/ml de EGCG con y sin complementos L, P y AA sobre la proliferación de las células del melanoma. Ni L, P, AA y EGCG tuvieron ningún efecto significativo sobre la proliferación de células a niveles de 10 y 20 µg/ml. Sin embargo, la EGCG a 50 µgm/ml redujo significativamente el número de células al 30%. Se observó un efecto similar con los complementos de L, P y AA.
Imagen 1: Efecto del complemento de Basal con 100 µM de ácido ascórbico (AA), 140 µM de prolina (P), 400 µM de lisina (L) y varios niveles de galato de epigalocatequina (EGCG) en la proliferación celular de las células del melanoma A2058.
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Células del cáncer de mama MDA-MB-231
En estos experimentos, el medio basal se complementó con 0, 10, 20, 50, 100 ó 200 µg/ml de EGCG (Imagen 2). Los resultados muestran que el complemento del medio basal con 50, 100 y 200 µg/ml de EGCG redujo significativamente el número de células hasta 66,1 ± 5,3, 33,6 ± 2 y 29,6 ± 0,8% si se compara con los correspondientes controles sin complementar. Las concentraciones de EGCG en el medio celular hasta 20 µg/ml no tuvieron ningún efecto significativo en la proliferación de las células.
Imagen 2: Efecto del galato de epigalocatequina (EGCG) en la proliferación de las células del cáncer de pecho MDA-MB 231.
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También se estudió el efecto del AA, L, P y de diferentes concentraciones de EGCG en la proliferación de las células cancerígenas. La Imagen 3 muestra que el número de células se redujo de forma no significativa hasta el 86,1 + 1,93% con AA, L y P. Una posterior adición de 20, 50 y 100 µg de EGCG a este compuesto redujo significativamente el número de células hasta 74 ± 5,8, 64,8 ± 1,6 y 22 ± 5% si se compara con el grupo correspondiente de control.
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Imagen 3: Efecto del complemento de Basal con 100 µM de ácido ascórbico (AA), 140 µM de prolina (P), 400 µM de lisina (L) y varios niveles de galato de epigalocatequina (EGCG) en la proliferación celular de las células del cáncer de mama MDA-MB 231.
El objetivo de este estudio consistió en la identificación de la combinación de nutrientes con los efectos antiproliferativos y antiinvasivos más eficaces sobre las células cancerígenas, dejando en segundo lugar la investigación de los mecanismos moleculares implicados. Aquí se pueden postular distintos mecanismos a través de los cuales se puede investigar el efecto inhibidor de los nutrientes implicados.
La actividad de las MMPs puede verse afectada por la lisina a través de mecanismos mediatizados por la plasmina aunque no se excluyen otros mecanismos. Las MMPs son segregadas como pro-enzimas y su activación está parcialmente mediada por la plasmina y su finalización requiere de formas activas de MMP-3. El mecanismo de activación de las distintas MMPs, detallado por Nagase (1997), indica que la MMP-3 también requiere la conversión de plasminógeno a su forma activa, plasmina. El núcleo activo de fijación del plasminógeno dispone de espacios donde se puede añadir específicamente la lisina. Por tanto, la lisina puede interferir con la activación del plasminógeno en plasmina por medio del activador de plasminógeno (Rath y Pauling, 1992), a través de la fijación a las zonas activas del plasminógeno. El ácido tranexámico, una lisina sintética análoga, se ha utilizado para inhibir la proteólisis inducida por plasmina por medio de este mecanismo.
Puesto que la actividad de la plasmina es esencial para inducir distintos tejidos de MMPs, la lisina puede interferir en la conversión del plasminógeno en plasmina y, por tanto, puede inhibir la activación de casi todas las MMPs. Además, se ha demostrado que el EGCG tiene un efecto inhibidor sobre la degradación de la matriz extracelular por medio de la inhibición de la MMP-2 (Demeule et al., 2000).
También es posible frenar la invasión de la matriz de las células del cáncer incrementando la estabilidad y fortaleza del tejido conjuntivo adyacente a las células cancerígenas y permitiendo el “encapsulamiento” del tumor. Esto requiere la optimización de la síntesis y de la estructura de las fibrillas de colágeno, para lo que son esenciales los residuos de hidroxilación de hidroxiprolina y de hidroxilisina en las fibras de colágeno. Es por todos sabido que el ácido ascórbico es fundamental para la hidroxilación de estos aminoácidos. El ácido ascórbico y la lisina L no se producen normalmente en el cuerpo humano; por tanto, los niveles sub-óptimos de estos nutrientes pueden aparecer en episodios patológicos o en dietas insuficientes. A pesar de que la prolina puede sintetizarse a partir de la arginina, su síntesis y/o la hidroxilación puede verse afectada por las condiciones patológicas. Así, se ha demostrado que el contenido de hidroxiprolina del tejido del tumor metastásico es mucho más inferior que el del tejido del tumor no metastásico (Chubainskaia et al., 1989).
Los medicamentos que redujeron la metástasis también incrementaron el contenido de hidroxiprolina de los tejidos (Hubinskaia et al., 1989). Se ha descubierto que el contenido de hidroxiprolina urinaria en pacientes de cáncer es superior que el existente en personas sanas o pacientes sin cáncer (Okazaki et al., 1992) Todos estos descubrimientos revelan efectos adversos de las células cancerígenas sobre el metabolismo de la prolina, así como posibles deficiencias condicionadas de la prolina en pacientes de cáncer.
Se han descubierto bajos niveles de ácido ascórbico en pacientes de cáncer. (Anthony y Schorah, 1982, Nunez et al., 1995, Kurbacher et al., 1996). El ácido ascórbico es muy citotóxico para las líneas de células malignas (Koh et al., 1998, Roomi et al., 1998) y ejerce una acción antimetástica (Liu et al., 2000). Nuestros estudios a partir de los compuestos de ácido ascórbico, prolina y lisina indicaron que dicha combinación ejerce un fuerte efecto antiproliferativo y antimetástico sobre las distintas líneas de células cancerígenas en estudios de cultivo de tejidos. Sin embargo, los efectos descendieron hasta la casi completa inhibición de la proliferación y de la metástasis.
El EGCG, una de las catequinas del extracto del té verde constituye el agente anti-cancerígeno más potente (Valcic et al., 1996, Mukhtr y Ahmed, 2000). Se ha demostrado que posee efectos inhibidores del crecimiento frente a determinadas líneas de células cancerígenas del cuerpo humano. (Ahmad et al., 1997, Liang et al., 1997, Yang et al., 1998). Por tanto, existe una sinergia en las actividades anticancerígenas del compuesto de AA, P y L y EGCG. Por ello, se planteó la hipótesis de que este compuesto junto con el EGCG podría ejercer una actividad sinérgica anticancerígena.
Queda claro por tanto que la combinación de AA, P y L con EGCG posee el potencial necesario para convertirse en una herramienta fundamental en la lucha contra los tres tipos de cáncer investigados en estos estudios. En el caso del cáncer de mama y del melanoma esta ayuda será mayor gracias a la drástica reducción de la metástasis celular. Respecto a las células del cáncer de colon, esta reducción, en términos de proliferación y de metástasis, puede llegar a conseguirse con la aplicación de altos niveles de EGCG.
Comentario
La Industria del bienestar nos ofrece una de las mejores prevenciones al alimentar a las células del cuerpo para evitar estos problemas. Busque beber constantemente té verde que por supuesto contiene el EGCG, además varias otras hierbas medicinales. Busque tomar un buen suplemento que contenga vitamina C y aminoácidos esenciales para ayudar a reforzar la matriz bilógica, razones suficientes para que cualquier médico vea con sus propios ojos los resultados. Nosotros estamos en una campaña de compartir estos conocimientos con la gente porque se necesita que este conocimiento está en manos de todos.
Si le interesa lo que ha leído no deje de asistir a nuestro siguiente entrenamiento médico.
Referencias
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Chubinskaia, S.G., Sevastìanova, N.A., Veksler, I.G. and Slutskii, L.I. (1989) Biochemical changes in the connective tissue components of malignant tumors and lungs in mice during metastatic spreading and chemotherapy. Vopr. Med. Kim. 35: 30-34.
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